(1) 石蜡切片脱蜡至水。
(2) 3%H2O2室温孵育5~10分钟,以消除内源性过氧化物酶的活性。
(3) 蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟,(如需采用抗原修复,可在此步后进行)。
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(4) 5~10%正常山羊血清(PBS 稀释)封闭,室温孵育10分钟。倾去血清,勿洗,滴加适当比例稀释的一抗或一抗工作液,37℃孵育1~2小时或4℃过夜。
(5) PBS冲洗,5分钟×3次。
滴加适当比例稀释的生物素标记二抗(1%BSA-PBS 稀释),37℃孵育10~30 分钟;或滴加第二代生物素标记二抗工作液,37℃或室温孵育10~30 分钟。
(6) PBS冲洗,5分钟×3次。
滴加适当比例稀释的辣根酶标记链霉卵白素(PBS 稀释),37℃孵育10~30 分钟;或第二代辣根酶标记链霉卵白素工作液,37℃或室温孵育10~30 分钟。
(7) PBS 冲洗,5 分钟×3 次。
显色剂显色(DAB 或AEC)。自来水充分冲洗,复染,封片。