(1) 冷PBS洗涤细胞两次，常温晾干；

 

(2) 加0.5ml细胞裂解液(0.1%NP40，0.5脱氧胆酸钠，0.1%SDS，用0.1M PBS配制，临用前加入2-4ul 0.1mg/ml亮肽素)。可用三去污法裂解液代替；

 

(3) 用1ml注射器接上21号针头冲三次，或用超声波剪切核酸；

 

(4) 加入用异丙醇配制的PMSF(50mM)至终浓度574uM；

 

(5) 样品冰浴45min；

 

(6) 15,000g 4˚C离心30min；

 

(7) 收集上清。