1、选用生长情况好，数量较多的原代细胞，冻存前一天换液一次。

2、贴壁细胞需用0.25%胰酶常规消化将细胞消化下来，将细胞悬液收集至离心管中。

3、1000rpm离心5分钟，弃上清液。

4、沉淀加含DMSO的培养液，计数，调整至(1-10)×106 /ml。

5、将悬液分至冻存管中，每管1 ml。

6、密封冻存管，封口一定要严，否则复苏时易出现爆裂。

7、用记号笔标明细胞种类，冻存日期。

8、按下列顺序降温：室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃过夜)→液氮。