(1)复制方法  成年雄性BALB/c小鼠，腹部剪毛(不损伤皮肤)约2.0cm×1.5cm，以3.3％2,4-二硝基氯苯(DNCB)丙酮橄榄油溶液(比例1：1)涂腹，1次/d，50μl/次，连续4d。第5日开始，将直径1mm的硅胶管插入小鼠结肠，插管尖端距肛门为3～3.5cm，以0.2～0.4％DNCB乙醇水溶液(比例3：2)灌肠，1次/d，每次2μl/g，连续4d。在造模的过程中，每日观察小鼠体重和大便性状，并采用疾病活动指数(DAI)对动物状态进行评分：①体重：正常为0分，比正常下降1％～5％、6％～10％、11％～15％、>15％，分别为1分、2分、3分、4分。②大便黏稠度：正常为0分，松散为2分，腹泻为4分。③大便出血：正常为0分，显性为2分。于灌肠后的第9日，断头取血，分离出血清，检测血清中N0、TNF-a水平；打开腹腔，分离大肠，沿肠系膜附着部纵行剪开肠壁，观察大体形态改变。并自病变严重部位取组织标本，置10％甲醛液中固定，常规石蜡包埋，HE染色，镜下观察结肠的病理学改变。大体形态评分标准：结肠无粘连(结肠与其他组织剥离较易)、无溃疡、无炎症为0分，结肠轻度粘连、局部充血为1分，结肠重度粘连并发现1处溃疡(<1cm)为2分，1处以上溃疡(<1cm)伴炎症为3分，多处溃疡(>1cm)伴炎症为4分。镜下病理学评分标准：正常结肠黏膜为0级，隐窝缺损1/3为1级，隐窝缺损2/3为2级，固有层覆盖单层上皮伴轻度炎症细胞浸润为3级，黏膜糜烂、溃疡伴显著的炎症细胞浸润为4级。或成年雄性大鼠，颈背部用10％Na2S溶液脱毛后，以2％DNCB丙酮液滴背，1次/d，5滴/次，连续14d。随后，以尼龙导管向肛内8cm结肠肠腔注入0.1％DNCB乙醇液，1次/d，0.25ml/次，连续4d。造模毕，每日观察模型动物的整体外观状况和消化道疾病表现，每周处死若干只动物，肉眼观察结肠黏膜面和浆膜面的外观状况，并截取病变部位置10％甲醛液固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，光镜检查溃疡形态、深度、肠壁各层炎症细胞种类和浸润程度，以及淋巴滤泡增生、纤维组织增生等改变。或成年雄性豚鼠，颈背部毛剪去约1平方厘米大小范围，其表面用2％DNCB乙醇液点滴，1次/d，5滴/次，连续10～14d。随后取直径为3mm的硅胶管，经肛门插入肠道深12cm，注入20％DNCB丙酮液0.5ml，2d后处死。取材、观察和评价方法同上。

(2)模型特点  模型小鼠灌肠24h开始出现腹泻，3d后体重显著下降，第5日时，0.2％DNCB灌肠有肠管粘连、胀气，镜下见腺体排列紊乱，杯状细胞减少，黏膜固有层弥漫性炎症细胞浸润，隐窝脓肿及溃疡明显可见，0.4％DNCB者结肠粘连广泛，近端肠腔扩张，有少量白色渗出物，结肠黏膜充血、坏死、多处溃疡形成，镜下隐窝缺损明显，组织结构紊乱，黏膜糜烂、出血、坏死和大面积深层溃疡。模型大鼠连续灌肠4次，精神不振，疲惫蜷缩，皮毛松乱，活动减少，食耗量下降，粪便稀溏或有黏液血便。末次灌肠后12d内，模型大鼠结肠黏膜呈不同程度的充血、水肿，表面被覆黏液、血液和坏死组织，并有明显的溃疡形成；溃疡周围的黏膜和黏膜下层组织充血、水肿，并有大量或中等量中性粒细胞和嗜酸性粒细胞，以及少量至中等量大单核细胞和淋巴细胞浸润；溃疡底多为富有血管的肉芽组织，部分有不同程度的纤维组织增生；肌层内亦有少量至中等量中性粒细胞和嗜酸性粒细胞浸润，偶见大单核细胞和淋巴细胞浸润。造模完成后12～50d，模型动物结肠仍表现为充血、水肿，但程度随时间逐步减轻；镜下可见，其结肠黏膜和黏膜下层组织轻度充血，有以淋巴细胞和嗜酸性粒细胞为主的炎症细胞浸润，偶见中性粒细胞和大单核细胞浸润；肌层内偶见淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润，部分模型动物肠壁仍有纤维组织增生，还可见局部黏膜萎缩、隐窝形状不规则和肠上皮再生等现象。模型豚鼠组织病理改变基本同模型大鼠，主要表现为肠壁充血、水肿、增厚，黏膜下层大量中性粒细胞及其他炎症细胞浸润，隐窝脓肿和溃疡形成，严重者伴有坏死。

(3)比较医学  2,4二硝基氯苯(DNCB)是一种小分子化学物质，它可以做为半抗原与组织蛋白结合成完全抗原，激发机体产生T细胞介导的细胞免疫反应。本实验将 DNCB涂擦于动物表皮，通过与皮肤蛋白结合而使淋巴细胞致敏，当致敏的淋巴细胞在肠道再次接触DNCB时便发生迟发型变态反应，引起类似于人类溃疡性结肠炎的病理变化，表现为腹泻、便血、结肠黏膜炎症乃至溃疡。模型动物结肠黏膜的组织病理特征与造模完成后的时间明显相关。在造模完成后12d内，结肠黏膜溃疡，周围组织及肌层可见显著的炎症细胞浸润，属溃疡发生期；12～50d时，结肠黏膜炎症细胞浸润减轻，部分肠壁有较明显的纤维组织增生，属溃疡恢复期。由于不同物种对DNCB反应不同，因此在模型制作过程中，DNCB的浓度、剂量、作用时间差异较大，需要实验者反复摸索。本模型比较适用于溃疡性结肠炎发病机制、炎症细胞参与反应的类型及方式的研究。本模型虽然周期长、不具备病变易复发等特点，但作为对于一个典型的胃肠道迟发型过敏反应的动物模型，目前仍属于应用最为广泛的溃疡性结肠炎动物模型之一。