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模型制备

慢性冠状动脉狭窄及侧支循环建立动物模型

2017年04月06日 浏览量: 评论(0) 来源:《人类疾病动物模型复制方法学》 作者:周光兴 责任编辑:yjcadmin

(1)复制方法  体重为25kg雄性小型猪,冠状动脉回旋支主干外径为(2.5±0.08)mm。主要仪器:Ameroid狭窄器(Ameroid constrictor,Research Instrument SW.USA):内径1.8~2.1mm,外径8mm,长5mm,戒指状。有效成分为酪蛋白衍生物,具亲水性,遇水自动缓慢膨胀。动物静脉或气体麻醉,气管插管,行人工呼吸,频率18次/min,潮气量400~450ml/次。右侧卧位,在胸骨正中切口,避开两侧胸腔膜,打开胸包,在左心耳下游离左冠状动脉回旋支主干至第一主分支前1.0~1.5cm,为防止冠脉痉挛,用1%利多卡因表面麻醉,置入Ameroid缩窄器。术中在胸腔与腹腔之间开放一通道,以便将心包内血液引流入腹腔。术后缝合心包、胸骨、皮肤。伤口碘伏消毒,予抗生素防止感染。动物在实验前及手术后1、2、3周各进行一次超声心动图检查。动物在实验结束时,通过静脉麻醉,游离股动脉,直视下套管插管,在心脏左前位偏角度用泛影葡胺造影剂选择性冠状动脉造影。在实验结束时,处死动物,于心肌短轴切面取心脏组织,做HE染色,光镜观察狭窄的心肌与缺血的心肌。术后3周动物冠状动脉回旋支出现完全闭塞或大于75%以上的狭窄。病变处有细小血管与远端血管分支或主干相通,出现广泛的侧支循环血管网。模型观察指标:超声心动图检查采用以下指标评价心肌整体及局部收缩与舒张功能,协助确认心肌缺血形成的部位及程度:左室舒张末内径(LVEDd)、左室收缩末内径(LVEDs)、左室短轴缩短率(FS)、射血分数(EF)、每搏输出量(SV)、心输出量(CO)、E/A比值(E:左室舒张期二尖瓣最大血流速度,A:左室收缩期二尖瓣最大血流速度)、局部心肌增厚率(△T%=(收缩末局部室壁厚度-舒张末局部室壁厚度)/舒张末局部室壁厚度)。冠脉造影主要观察冠状动脉左旋支闭塞情况和微小侧支循环建立情况。病理学检查主要观察炎细胞浸润情况和微血管增生情况以及弹性纤维的变化。

(2)模型特点  猪左回旋支有较多的固有侧支循环。因此动物不易死亡,成功率高,虽有开胸的缺点,但模型形成时间短,实验结果可靠。Ameroid方法易行,成功率高,重复性强,判断血管狭窄或闭塞的指标直接、可靠。此动物模型引起的心肌缺血是一个渐进的过程,逐步持续发生,有利于侧支循环的建立。此模型为以促进冠脉侧支循环生成为治疗目的药物、血管生长因子用于治疗冠心病提供了有效的动物模型。另外猪的解剖学和代谢机制与人有更多的相似,其侧支循环的建立情况较犬更与人类相似。

(3)比较医学  模型中主要运用管脉造影技术研究侧支循环的建立。而选择性管脉造影技术仅能显示直径大于100μm的血管,而冠状动脉侧支循环的口径为20~200μm,小于100μm的血管或心内膜的侧枝血管不能显影。另外猪的冠状动脉解剖结构有一定的变异,右冠优势的动物左旋支供血区域心肌节段相对变小,会导致超声指标有一定的误差。同时人体内组织原本存在大量的侧支循环,如何区分原有的和新生的,需采用组织化学及免疫组化方法,对侧支循环血管进行定性和定量研究。

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