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模型制备

大鼠慢性肾炎模型

2024年07月31日 浏览量: 评论(0) 来源:《常用医药研究动物模型》 作者:主编 苗明三 朱飞鹏 责任编辑:yjcadmin

1.造模材料  动物:健康低龄雄性SD大鼠(约100g),雄性新西兰兔,雄性SD大鼠(200~250g);药物:兔抗鼠Thy-1抗血清(AST),完全弗氏佐剂,抗兔IgG荧光抗体(1:10)。

2.造模方法

(1)免疫新西兰(NZ)  白兔:低龄SD雄性大鼠(100g),麻醉后取胸腺,剪碎并挤出胸腺细胞,经尼龙网过滤除去混杂的组织,滤液为淋巴细胞悬液,以等体积生理盐水和完全弗氏佐剂稀释至1×10的7次方个/ml,注射至白兔背部皮下,每只3×10的7次方个胸腺细胞。2、4周时分别静脉注射3×10的7次方个胸腺细胞,强化免疫。

(2)测定抗血清效价:第2次静脉注射胸腺细胞后第3天,从兔耳缘静脉取血2ml,测定血清抗胸腺细胞抗体的效价。方法如下:分离大鼠胸腺细胞,用生理盐水稀释至1×10的8次方个/ml,取1滴细胞悬液滴于干净玻片,吹干。95%的酒精固定5min,吹干。将正常NZ白兔血清、抗血清原液及其1:10、1:20、1:40、1:80,即1:160的稀释液各80μl滴加在胸腺细胞涂片上,均匀散开。37℃孵育40min后PBS(0.01mol/L,pH74)冲洗。在加抗兔IgG荧光抗体(效价1:10,上海生物制品所),37℃孵育40min,PBS冲洗。当效价大于1:80(即1:80的稀释液仍有较强的染色)时将兔放血,离心后,将血清保存于-4℃。

(3)提纯血清:兔抗血清用饱和硫酸铵法提纯,具体步骤如下:抗血清(体积设为 ml)中加入等体积的PBS(0.01mol/L,pH7.4)及2倍体积的饱和硫酸铵溶液搅拌均匀。在4℃放置30min后,6000~9000r/min离心15min,去掉上清(为清蛋白部分),沉淀溶于PBS中,再加入2ml饱和硫酸铵溶液,4℃放置30min。再6000~9000r/min离心15min,沉淀继续溶于PBS中,如上重复3次。最后沉淀溶于少量PBS中,在4℃透析24h。用钠氏试剂检测无铵离子时即得粗制的IgG。粗制的IgG测定蛋白浓度后,于-20℃保存。

(4)大鼠抗Thy-1抗体肾炎模型的制作:正常对照组尾静脉注射生理盐水2ml/100g。实验第30天处死大鼠,模型组于实验当日腹腔麻醉后由尾静脉注射兔抗鼠抗Thy-1抗体血清1ml/100g和正常兔血清1ml/100g。

3.造模原理  抗胸腺细胞血清法诱发大鼠系膜增殖性肾炎模型。

4.造模后一般变化  造模之后模型组大鼠均出现不同程度的精神不振、摄食减少、生长迟缓、身体消瘦、蜷缩、体毛无光泽、大便稀等现象。

5.造模后生化变化  24h尿蛋白定量测定和血尿素氮(blood urea nitrogen, BUN)肌酐(serum creatinine, Scr)测定结果显示,模型组比对照组明显升高。模型组大鼠尿纤维蛋白降解产物(fibrin degradation product, FDP)测定全部阳性,阳性率为100%。


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